1常用器械及使用方法
常用的器械有解剖刀、外科手術(shù)剪、腦刀、骨剪、鑷子、骨鋸、探針、拉鉤、載玻片、放大鏡、注射器等。
1.解剖刀 主要用于切開和分割軟組織，刀片宜用血管鉗(持針鉗也可)夾持安裝，避免割傷手指。常用的持刀法有以下4種：執(zhí)弓式、抓持式、執(zhí)筆式、反挑式。
2.手術(shù)剪用于分離與剪開。
3.血管鉗 用于分離和鉗夾組織，鉗夾縫合針和布巾等。
4.手術(shù)鑷 用于夾持組織，以利于解剖和縫合。
5.拉鉤 用于牽引和暴露。
2病理取材的基本要求
從大體標(biāo)本上按照病理檢查的目的和要求切取適當(dāng)大小的組織塊，供制片進(jìn)行顯微鏡檢查。為達(dá)到診斷的目的，取得合適的組織是關(guān)鍵。這不僅要求材料要盡可能新鮮，而且要有一定的數(shù)量和良好的質(zhì)量。
1.活檢組織標(biāo)本在手術(shù)切下后應(yīng)立即放入10％福爾馬林固定(電子顯微鏡標(biāo)本則用適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ汗潭?。尸檢標(biāo)本應(yīng)爭取在死亡后盡可能短的時間內(nèi)取材。
2.通常選擇正常與病變交界處組織，即包括病變本身及病變周圍組織。
3.對照組動物相同器官取材時，選材部位應(yīng)盡量一致。
4.肉眼看不到明顯的病變時，各試驗組選取標(biāo)本位置應(yīng)一致。
5.所選組織應(yīng)包括臟器全部層次結(jié)構(gòu)或重要結(jié)構(gòu)，如腎應(yīng)包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂。
6.體積大和分葉的器官，應(yīng)視不同組織選取多個部位，小器官可整體取材并固定，如淋巴結(jié)、扁桃體、甲狀腺等。
7.胃腸標(biāo)本應(yīng)將內(nèi)容物沖洗掉，以免內(nèi)容物影響組織固定，產(chǎn)生自溶。
8.所取材料應(yīng)盡量保持肉眼標(biāo)本的完整性，不宜過厚或過薄，一般厚約3～5mm，大小為1.5～2cm2。
9.切取組織時不要擠壓，應(yīng)使用鋒利刀具，少用剪刀，勿選用被器械鉗壓過的部位。
10.標(biāo)本取材要熟練，盡可能快地完成整個過程，特別是易自溶的組織，如腸道、腦、腺體等。
11.第一次取材組織不能作出確診時，須再次甚至多次取材。每次取材均應(yīng)將送檢單加以記錄。
12.組織取材完畢，標(biāo)本應(yīng)按序存放，并加足固定液以備復(fù)查之用。通常保留1個月后，再清理銷毀。
3病理取材的基本操作
1.切開 在同一平面上時，先繃緊組織，將刀刃與平面垂直，用力要得當(dāng)，一次垂直切開，切口整齊而不偏斜，禁止斜切和鋸切，以減少損傷。切開多層組織時，一般應(yīng)按組織層次分層切開，避免損傷深層組織器官。
2.組織分離法 可用銳性分離法，使用刀、剪等銳性器械直接切割，如皮膚、黏膜、精細(xì)結(jié)構(gòu)和緊密連接組織的分離；也可用鈍性分離法，使用分柄、止血鉗、剝離器、手指等分離，如肌肉、疏松結(jié)締組織等的分離。
3.結(jié)扎 用絲線打結(jié)的方法結(jié)扎組織和血管，用于縫合器官和皮膚。
4.止血 大量出血導(dǎo)致胸、腹部積血使剖檢視野模糊不清，可能會影響和干擾病變的辨別和取材，因此動物剖檢有時要進(jìn)行止血，常用方法有紗布塊壓迫止血法、鉗夾止血法、結(jié)扎止血法。
4取材程序
剖檢順序多為先腹腔后胸腔，再腦、脊髓、骨髓、皮膚肌肉等。取材順序基本與此相同。
1.腹腔和腹腔器官 沿腹部正中線切開劍突至肛門之間的腹前壁，再沿最低位肋骨分別向左右兩側(cè)切開側(cè)腹壁至脊柱兩旁，完全暴露腹腔器官。觀察有無積液、血液和炎性滲出物，如有則用吸管吸出，測量容積并經(jīng)離心沉淀涂片檢查，必要時作細(xì)菌培養(yǎng)。檢查黏膜是否光滑，有無充血、淤血、出血、破裂、膿腫、粘連、腫瘤、寄生蟲等，檢查膈的緊張度及有無破裂。
(1)脾：檢查大小、厚薄、硬度、性狀、色澤，是否肥厚、破裂等。然后沿長軸將脾切成兩半，切面要平整，檢查脾小梁、紅髓、濾泡的色澤、切面的出血量。
(2)胰腺：檢查胰腺色澤和硬度，切面檢查有無出血。
(3)胃腸：檢查胃的大小、胃腸道漿膜面的色澤，有無粘連、腫瘤、寄生蟲結(jié)節(jié)。然后沿胃大彎、腸系膜附著部依次剪開胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸。觀察胃內(nèi)有無異物，內(nèi)容物的氣味及性狀，除去內(nèi)容物，檢查黏膜顏色，有無充血、出血、化膿。采用邊剪開邊觀察的辦法檢查腸管，觀察腸內(nèi)容物數(shù)量、性狀，有無氣體、血液、異物、寄生蟲，腸黏膜皺襞有無增厚、水腫、充血、黏液量、潰瘍、壞死、淋巴組織性狀及有無炎癥。
(4)腎：首先檢查腎的大小、硬度，被膜是否容易剝離，腎表面的色澤、平滑度，有無瘢痕、出血變化。然后檢查切面皮質(zhì)和髓質(zhì)的色澤，有無淤血、出血、化膿和梗死。注意觀察皮質(zhì)和髓質(zhì)交界處的切面是否隆凸，以及腎盂、輸尿管、腎淋巴結(jié)的性狀，有無腫瘤及寄生蟲等。
(5)肝：首先檢查肝的大小、被膜的性狀、邊緣的厚薄、實質(zhì)的硬度和色澤，以及肝淋巴結(jié)、血管、肝管等的性狀。然后作切面，檢查切面的出血量、色澤，肝小葉性狀、有無膿腫、肝壞死等變化。
(6)腎上腺：觀察外形、大小、色澤和硬度，作縱切和橫切，檢查皮質(zhì)和髓質(zhì)的色澤及有無出血。
2.盆腔器官
(1)膀胱：檢查膀胱的大小、尿量及色澤，黏膜有無出血、炎癥和結(jié)石等。
(2)雄性生殖器官：檢查睪丸、附睪、凝固腺、前列腺有無粘連、出血、水腫、積液等。
(3)雌性生殖器官：沿子宮體背側(cè)剪開子宮角，檢查子宮內(nèi)膜的色澤、有無充血、出血、炎癥等，觀察卵巢和輸卵管有無粘連、出血、水腫、積液等。
3.胸腔、口腔及其器官用鑷子夾住胸骨劍突，剪斷膈肌與胸骨的連接，提起胸骨，在胸椎兩側(cè)分別剪斷左、右側(cè)胸壁的肋骨，取下整個胸壁，打開胸腔，依次取出胸腺和心臟。將下頜骨的兩下頜支內(nèi)側(cè)與舌連接的肌肉切斷，將咽、喉、氣管、食管與周圍組織分離，用鑷子夾住氣管向上提起，剪斷肺與胸膜的連接韌帶，然后將咽、喉、氣管、食管連同整個肺一并取出。如有積液應(yīng)觀察其數(shù)量和性狀，盡量吸取，測量容積并涂片，檢查胸膜色澤，有無出血、充血或粘連。
(1)心臟：剪開心包膜，暴露心臟，注意心包的光澤度及心包內(nèi)液體的情況，心臟的大小、外形、心外膜情況。自下腔靜脈入口處至右心房作直線剖開，從此直線中點沿心臟右緣剖至心尖部，從距離心尖部與心室間隔右側(cè)1cm處平行地剖至肺動脈；檢查右心房、右心室、三尖瓣、肺動脈瓣、腱索有否病變。自左、右靜脈入口處將左心房直線切開，沿心臟左緣剖至心尖部，再從距離心尖部與心室間隔左側(cè)1cm處平行地剖開左心室的前壁和主動脈，檢查二尖瓣、主動脈瓣、腱索有無病變，左心房、左心室內(nèi)壁有無出血和感染。自冠狀動脈口起剪開前降支和旋支，在主動脈根部右側(cè)，于右心室的心外膜找到右冠狀動脈主干，先橫切一刀，再剪至后降支；觀察有無粥樣硬化和血栓等。
(2)口腔：檢查牙齒的變化，口腔黏膜的色澤，有無外傷、潰瘍和白斑，舌黏膜有無出血、外傷及舌苔的情況。
(3)咽喉：觀察喉頭、會厭軟骨黏膜的色澤、淋巴結(jié)的性狀及喉囊有無積膿。
(4)鼻腔：檢查鼻腔和鼻中隔黏膜的色澤，有無出血、炎性水腫、結(jié)節(jié)、糜爛、潰瘍穿孔及瘢痕等。
(5)下頜及頸部淋巴結(jié)：檢查下頜及頸部淋巴結(jié)的大小、硬度、有無出血和化膿等。
(6)氣管：檢查氣管有無出血、黏液量等。
(7)肺：檢查肺的色澤，有無出血、炎癥、肺氣腫、肺萎縮、腫瘤等。
(8)其他器官：檢查胸腺、甲狀腺、扁桃體等的色澤，有無粘連、一出血、水腫等。
4.顱腔及腦 以猴為例，剝離顱頂部軟組織，沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm處的連線，用弓形鋸環(huán)繞該線鋸開顱骨外板及板障，然后用丁字鑿輕輕鑿開內(nèi)板，揭開顱蓋，此時可見覆蓋于腦表面的硬腦膜，切開硬腦膜暴露腦組織，在距顱骨鋸口斷端上0.5cm處，從前向后環(huán)行剪開硬腦膜，枕部的硬腦膜應(yīng)保留1.5cm長，防止取腦過程向后推壓腦組織時，枕骨斷端損壞枕葉腦組織。向后方輕輕揭起硬腦膜及大腦鐮，暴露腦組織，用手指從額骨前上方伸入顱前窩，輕輕推壓大腦額葉，直至見到篩板上的嗅球為止，切斷嗅絲與嗅球的聯(lián)系，將嗅球與腦一齊拉起，見到視神經(jīng)和視交叉時立刻停止，在腦底附近依次切斷頸內(nèi)動脈、視神經(jīng)，再將腦向后拉，可見到垂體及漏斗，繼續(xù)將腦向后拉起，切斷連于腦的腦神經(jīng)。從腦干腹側(cè)面把手術(shù)刀伸入枕骨大孔，切斷脊髓，即可將腦取出，用流水沖洗干凈備用。新鮮腦很軟，易變形和受挫傷，操作過程中必須用手扶托，取出腦后應(yīng)立刻用紗布包裹，浸泡固定液中保存，以免變形。
檢查軟腦膜、硬腦膜血管充盈情況，腦回之間的腦溝中液體的數(shù)量與色澤，腦表面凸起或凹下的地方是否明顯，可用手觸摸判定其硬度。用刀將腦做一水平切面，保留胼胝體，暴露側(cè)腦室，注意檢查尾狀核有無出血、軟化灶，側(cè)腦室內(nèi)容物數(shù)量、性質(zhì)，然后將腦做多處切面，檢查有無變化。
5不同組織的取材方法
對犬進(jìn)行尸檢取材時，各器官組織的取材部位和組織塊數(shù)大致如下：
1.心和大血管：左、右心室，室間隔各1塊，包括由外膜到內(nèi)膜各層肌組織。左、右心耳各一塊。主動脈1塊。
2.氣管、肺：氣管1塊。肺3～5塊，取自不同的葉。
3.肝、膽囊：肝2～3塊，切成正方形和長方形。膽囊1塊。
4.脾：1～2塊。
5.胰：1塊。
6.腎：右腎1塊，切成正方形，左腎1塊，切成長方形，都包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂。
7.膀胱：1塊。
8.腎上腺：左、右各取1塊。
9.消化道：食管、胃、十二指腸、小腸、大腸各取1塊。
10.骨：胸骨1塊。
11.胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、唾液腺：各1塊。
12.子宮：宮頸1塊，宮體1～2塊。
13.睪丸、附睪或卵巢：1塊。
14.大腦、小腦、腦干：各1塊。
15.垂體：1塊，前葉或包括前、后葉。
16.視神經(jīng)：1塊。
17.頸髓、胸髓、腰髓、坐骨神經(jīng)：各1塊。
18.乳腺或前列腺：1塊。
19.注射部位皮膚：1塊。
20.頸部淋巴結(jié)：2～3個。
注意如某些臟器有嚴(yán)重病變，或有特殊情況，應(yīng)增加取材組織塊數(shù)，以便徹底檢查明確診斷。
對小鼠、大鼠進(jìn)行尸檢取材時，各器官組織的取材部位和組織塊數(shù)大致如下：
1.心和大血管：心臟1塊，其中包括左、右心室，左、右心耳，室間隔。主動脈1塊。
2.氣管、肺：氣管1塊。肺3～5塊，取自不同的葉。
3.肝、膽囊：肝2塊，切成正方形和長方形。膽囊1塊。
4.脾：1～2塊，取最寬處。
5.胰：1塊。
6.腎：右腎1塊，切成正方形，左腎1塊，切成長方形，都包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂。
7.膀胱：1塊。
8.腎上腺：左、右各取1塊。
9.消化道：食管、胃、空腸、回腸、結(jié)腸有淋巴結(jié)處和直腸各取1塊。
10.骨：胸骨1塊。
11.胸腺、甲狀腺、甲狀旁腺、唾液腺：各1塊。
12.子宮：宮頸1塊，宮體1～2塊。
13.睪丸、附睪或卵巢：1塊。
14.大腦、小腦、腦干：各1塊。
15.垂體：1塊，前葉或包括前、后葉。
16.視神經(jīng)：1塊。
17.頸髓、胸髓、腰髓、坐骨神經(jīng)：各1塊。
18.乳腺或前列腺：1塊。
19.注射部位皮膚：1塊。
20.頸部淋巴結(jié)和腸系膜淋巴結(jié)：2～3個。
6活檢組織取材
除以上各點外(見前述)，還應(yīng)注意取材后立即用液氮速凍，而且制作冰凍切片的同一塊組織一份標(biāo)本要做常規(guī)石蠟切片，用于 HE染色和特殊染色等，有的還要進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色甚至電子顯微鏡觀察，因此其組織取材要迅速完成。盡量保持組織結(jié)構(gòu)完整。
細(xì)胞標(biāo)本取材和制片方法一般有印片法、穿刺法、沉淀法和活細(xì)胞標(biāo)本的制備等。
1.印片法常用于活檢和手術(shù)標(biāo)本，新鮮標(biāo)本沿病灶中心剖開，將病灶區(qū)輕壓于載片上，吹干后立即將其浸入固定液內(nèi)5～10min，取出自然干燥，低溫儲存。
2.穿刺法常用于淋巴結(jié)、軟組織、肝、腎和肺等，穿刺液少，可直接涂在載片上，細(xì)胞盡量涂均勻。穿刺液多，細(xì)胞豐富，可滴入裝有1～2ml Hanks液試管內(nèi)，輕輕攪拌，以500轉(zhuǎn)/分低速離心5～10min，棄上清，將沉淀制成細(xì)胞懸液(2×100000/ml)。吸一滴涂于載片上，鏡檢以細(xì)胞較密不重疊為好。干燥后即可固定。
3.沉淀法主要用于胸水、腹水、尿液和腦脊液等體液多而細(xì)胞少的標(biāo)本。常規(guī)細(xì)胞標(biāo)本制備：細(xì)胞多時，可直接吸取少量液體直接涂片，細(xì)胞少時，可吸取底部自然沉淀液5ml，以1500轉(zhuǎn)/分離心10min，再涂片。
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