目的 探討微RNA （microRNA，miRNA或miR） -887-3p對(duì)大鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其 潛在的分子機(jī)制。
方法 取8周齡SPF級(jí)雄性SD大鼠的纖維環(huán)組織，離心制備并鑒定纖維環(huán)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為4 組：正常組 （Normal group） 是不做任何處理的原代纖維環(huán)細(xì)胞；對(duì)照組 （Control group） 用10 ng/mL白細(xì)胞介 素-1β （interleukin-1β，IL-1β） 處理纖維環(huán)細(xì)胞24 h，形成退變細(xì)胞模型；干擾組 （miR-887-3p inhibitor） 是在對(duì) 照組的基礎(chǔ)上用 Lipo3000 轉(zhuǎn)染 miR-887-3p 抑制子；過(guò)表達(dá)組 （miR-887-3p mimics） 是在對(duì)照組的基礎(chǔ)上用 Lipo3000轉(zhuǎn)染miR-887-3p模擬物。采用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞活力；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率；實(shí)時(shí)熒光 定量PCR法檢測(cè)miR-887-3p和鼠雙微體4 （murine double minute 4，MDM4） mRNA的表達(dá)；蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè) MDM4、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表達(dá)水平。
結(jié)果 免疫熒光染色法鑒定分離培養(yǎng)的細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，大鼠椎間盤纖維 環(huán)細(xì)胞中Collagen I的陽(yáng)性率在90%以上，提示纖維環(huán)細(xì)胞純度大于90%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，利用IL- 1β 構(gòu)建纖維環(huán)退變細(xì)胞模型后，miR-887-3p 表達(dá)水平與正常組相比顯著上升 （P<0.001）；與對(duì)照組相比，轉(zhuǎn)染 miR-887-3p抑制子后，miR-887-3p表達(dá)水平顯著下降 （P<0.001）。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果表明，與正常組相比，對(duì)照組 細(xì)胞活力顯著下降 （P<0.001）；與對(duì)照組相比，抑制miR-887-3p的表達(dá)后，細(xì)胞增殖能力顯著增強(qiáng)；miR-887-3p 過(guò) 表 達(dá) 后，細(xì) 胞 增 殖 能 力 顯 著 下 降。流 式 細(xì) 胞 儀 檢 測(cè) 結(jié) 果 表 明，與 正 常 組 相 比，對(duì) 照 組 的 細(xì) 胞 凋 亡 率 顯 著 增 加 （P<0.001）；與對(duì)照組相比，miR-887-3p干擾組的細(xì)胞凋亡率顯著降低 （P<0.001），miR-887-3p過(guò)表達(dá)組 的細(xì)胞凋亡率顯著增加 （P<0.001）。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，對(duì)照組中Bcl-2的表達(dá)水平顯著 降低 （P<0.001），Caspase-3的表達(dá)水平顯著升高 （P<0.001）；與對(duì)照組相比，miR-887-3p干擾組中Bcl-2和MDM4 表達(dá)水平顯著升高 （P<0.01），Caspase-3的表達(dá)水平顯著降低 （P<0.01）；而miR-887-3p過(guò)表達(dá)組中Bcl-2和MDM4 表達(dá)水平顯著降低 （P<0.05），Caspase-3的表達(dá)水平顯著升高 （P<0.05）。實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白免疫印跡結(jié)果 顯示，干擾 miR-887-3p 后，MDM4 蛋白和 mRNA 的表達(dá)增加 （P<0.001）；過(guò)表達(dá) miR-887-3p 后，MDM4 蛋白和 mRNA的表達(dá)降低 （P<0.01，P<0.001）。
結(jié)論 miR-887-3p可能通過(guò)調(diào)控MDM4的表達(dá)來(lái)影響大鼠椎間盤纖維環(huán) 細(xì)胞的增殖和凋亡，進(jìn)而影響椎間盤退變的發(fā)生和發(fā)展。
閱讀原文：微RNA-887-3p能抑制大鼠椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞中MDM4表達(dá)和細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡.pdf
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