目的 建立樹鼩永生化角膜基質(zhì)細胞（ ｃｏｒｎｅａｌ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌｓ，ＣＳＣｓ）系，并探討其在病毒感染中的應用。
方法 利用組織塊貼壁培養(yǎng)法分離培養(yǎng)樹鼩原代 ＣＳＣｓ，將攜帶 ＳＶ４０Ｔ 基因的慢病毒轉(zhuǎn)染細胞后，再挑取單克 隆進行傳代培養(yǎng)，傳至 ５０ 代以上進行形態(tài)學觀察并與 ４０ 代細胞形態(tài)進行比較，波形蛋白（ ｖｉｍｅｎｔｉｎ）和 ＳＶ４０Ｔ 基因 免疫熒光鑒定、核型鑒定、細胞增殖曲線測定。 用單純皰疹病毒 １ 型（ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ?１，ＨＳＶ?１） （ＭｃＫｒａｅ 株）、 寨卡病毒（Ｚｉｋａ ｖｉｒｕｓ，ＺＩＫＶ）（ＧＺ０１ 株）、登革病毒Ⅱ型以及甲型流感病毒 Ｈ１Ｎ１（ＰＲ８ 株）在該細胞上進行病毒感染 實驗。
結(jié)果 傳至 ５０ 代以上的樹鼩永生化 ＣＳＣｓ 呈梭形，細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)與 ４０ 代相比仍較好。 ｖｉｍｅｎｔｉｎ 和 ＳＶ４０Ｔ 基 因免疫熒光表達陽性。 增殖曲線結(jié)果顯示：細胞生長旺盛，第 ４ ～ ５ 天時處于對數(shù)生長期。 原代細胞核型的染色體 數(shù)穩(wěn)定為 ６２ 條，而永生化細胞第 ２１、５６ 代突變?yōu)?６４ 條且保持穩(wěn)定。 病毒感染實驗顯示：樹鼩永生化 ＣＳＣｓ 對 ＨＳＶ? １（ＭｃＫｒａｅ 株）、ＺＩＫＶ（ＧＺ０１ 株）、登革病毒Ⅱ型以及 Ｈ１Ｎ１（ＰＲ８ 株）病毒敏感，產(chǎn)生較高感染滴度，分別為 １.３２ × １０ ５ 、５.６２ × １０ ６ 、２.６９ × １０ ７ 、７.７６ × １０ ４ ＣＣＩＤ５０ ／ ｍＬ。
結(jié)論 成功建立了樹鼩永生化 ＣＳＣｓ 細胞系，提示該細胞系 可用于單純皰疹病毒、寨卡病毒、登革病毒和甲型流感病毒感染眼角膜疾病的作用機制及抗病毒藥物的 研究。
閱讀原文：樹鼩角膜基質(zhì)永生化細胞系的構(gòu)建及其在病毒感染性方面的研究.pdf
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