中醫(yī)界運用現(xiàn)代科學方法進行相關(guān)研究已有多年歷史，在病證動物模型上頗有收獲。對脾虛證動物模型發(fā)展歷程進行回顧，對動物選擇、造模方法、評價指標、消化系統(tǒng)病證結(jié)合模型進行總結(jié)和評論。模型動物多選用以大鼠為代表的小型嚙齒類。目前，多基于病因病機造模，而較少使用化學藥物與物理因素造模，復(fù)合因素造模法最常見。評價指標則分為中醫(yī)證型指標、與“脾”功能和特性有關(guān)量化指標，以及方劑反證。功能性腹瀉/消化不良為代表的脾虛證病證結(jié)合模型是目前研究的重心。脾虛證動物模型研究成績斐然的同時仍存在許多不足，如缺乏脾虛證模型行業(yè)標準和共識，評價指標缺乏系統(tǒng)性和整體性，脾虛理論的現(xiàn)代闡釋缺乏統(tǒng)一，學界亟需解決上述問題以促進發(fā)展。
病因病機造模
脾虛證多因饑飽失?；蜻^食肥甘厚味生冷，或勞倦過度，或思慮過度、情志失調(diào)，或吐瀉日久、損傷脾土，或濕邪侵襲、內(nèi)困脾土，或稟賦不足、素體脾胃虛弱，或久病調(diào)養(yǎng)失慎，或他臟病變及脾，或過服苦寒及攻伐藥物等致脾胃氣血陽陰受到損傷所致。
根據(jù)中醫(yī)理論造模更符合臨床情況，具有中醫(yī)特色，因此應(yīng)用最為廣泛。造模方法如下：
(1) 苦寒瀉下法：根據(jù)苦寒瀉下之劑易傷脾胃的病機，采用番瀉葉煎劑、生大黃煎劑、小承氣湯煎劑等苦寒瀉下劑灌飼實驗動物。
(2) 耗氣破氣法：有學者以耗氣破氣為造模因素，根據(jù)脾虛忌下，降泄藥物易耗氣破氣，采用厚樸三物湯等耗氣破氣之方劑。亦有學者認為此法仍屬苦寒瀉下法的范疇。
(3) 飲食失節(jié)法：飲食失節(jié)，則脾胃乃傷。采用禁食與暴飲暴食交替實施，或給予限量飲食，或高脂、高乳糖飼料飼養(yǎng)，或灌胃厚膩豬油等。
(4) 飲食偏嗜法：灌胃酸味的食醋，或苦味的黃連、杏仁水煎劑，或酒醋結(jié)合，或給予辛溫燥熱的混合飼料等。
(5) 勞倦過度法：根據(jù)“勞則氣耗”的病機，采用振蕩器長時間振蕩，或跑步機跑步，或強制游泳法，或小平臺站立法。
化學藥物與物理因素造模
有學者根據(jù)臨床上運用化學藥物或放射療法治療的副作用類似脾虛證癥狀來造模，這類方法具有操作簡單、成模迅速、癥狀明顯的優(yōu)點，但因機制單一，不符合脾虛證復(fù)雜且緩慢的病理過程，在研究中應(yīng)用較少。造模方法如下：
(1) 利血平注射法：脾虛患者常見交感神經(jīng)抑制，副交感神經(jīng)偏亢的癥狀，利血平消耗兒茶酚胺的作用使副交感神經(jīng)興奮，與脾虛癥狀相似。
(2) 秋水仙堿法：長期使用秋水仙堿導(dǎo)致消化吸收不良、肌無力等副作用，與中醫(yī)脾氣虛證密切相關(guān)。
(3) X射線照射法：放射治療所致副作用臨床表現(xiàn)以中醫(yī)脾虛、氣虛為主?；诖爽F(xiàn)象通過X射線照射大鼠腹部塑造慢性脾氣虛模型。
復(fù)合因素法造模
即采用上述兩種及以上方法來造模，使動物模型更加符合臨床的復(fù)雜病情，是目前主流的造模方法。如飲食失節(jié)法+勞倦過度法，可使用隔日禁食+小平臺站立；苦寒瀉下法+飲食偏嗜法，可使用灌胃大黃煎劑+乙醇灌胃；飲食失節(jié)法+勞倦過度法+苦寒瀉下法，可使用豬油甘藍飼喂+強制游泳+灌胃番瀉葉煎劑。
消化系統(tǒng)疾病的脾虛證候的病證結(jié)合模型研究
如今中醫(yī)病證同重，中醫(yī)脾胃理論與現(xiàn)代消化系統(tǒng)疾病關(guān)系密切，脾虛證模型日臻成熟，學界將重心轉(zhuǎn)移到消化系統(tǒng)疾病脾虛證病證結(jié)合模型研究，常見疾病有功能性腹瀉、功能性消化不良、便秘、胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎等，其中功能性腹瀉和功能性消化不良發(fā)病中脾虛證占據(jù)絕大部分。病證結(jié)合模型造模思路較為統(tǒng)一，即選取公認的疾病造模方式結(jié)合上述基于病因病機的脾虛證造模方法。消化系統(tǒng)疾病癥狀與脾虛證癥狀多有重疊，還應(yīng)關(guān)注模型動物非重疊癥狀以明確病和證均得到復(fù)刻。
功能性腹瀉脾虛證模型
用高乳糖飼料結(jié)合水平臺站立法建立功能性腹瀉脾虛證模型，對模型不同時間節(jié)點的各項指標進行觀測，綜合評價模型，并灌胃四君子湯反證其模型。用同樣方法建立功能性腹瀉脾虛證大鼠模型，發(fā)現(xiàn)腸道黏膜微絨毛形態(tài)微觀結(jié)構(gòu)的改變，結(jié)腸黏膜組織中的水通道蛋白4(AQP4）、水通道蛋白8(AQP8）的表達水平降低，水分吸收減少可能是導(dǎo)致腹瀉的原因。
功能性消化不良脾虛證模型
有研究采用碘乙酰胺灌胃疊加水平臺站立法建立功能性消化不良脾虛證模型大鼠，發(fā)現(xiàn)大鼠抓力、胃排空率明顯降低，促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（Corticotropin Releasing Factor，CRF）和尿皮質(zhì)素2（Urocortin 2，UCN2）表達明顯降低，胃組織線粒體呼吸鏈復(fù)合物IV亞單位（Mitochondrial Respiratory Chain ComplexⅣA，COX VA）蛋白和m RNA表達降低，能量代謝受損；胃體組織Ca2+/鈣調(diào)蛋白（Calmodulin，Ca M）、肌球蛋白輕鏈激酶（Myosin Light Chain Kinase，MLCK）、肌球蛋白輕鏈（Myosin Light Chain，MLC）蛋白及基因的表達降低，胃動力，胃體、胃竇平滑肌肌條收縮力和收縮周期頻率紊亂；胃組織蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（Protein Kinase R-like Endoplasmic Reticulum Kinase，PERK）蛋白表達增加，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）加強；小腸組織葡萄糖轉(zhuǎn)運體蛋白1（Glucose Transporter 1，GLUT1）蛋白與m RNA表達降低，葡萄糖吸收能力降低。
便秘脾虛證模型
脾虛型便秘多用KM小鼠，采用“番瀉葉灌胃+控制飲食、饑飽失常法”造模。先用純番瀉葉溶液灌胃，制造脾虛證模型，待成功后，再控制飲食，給予模型動物間斷性喂食的方法制備便秘模型。
胃潰瘍脾虛證模型
胃潰瘍脾虛證模型多用大鼠，采取大黃苦寒瀉下法建立脾虛動物模型脾虛造模成功后，灌胃無水乙醇刺激胃黏膜造成胃潰瘍。
潰瘍性結(jié)腸炎脾虛證模型
潰瘍性結(jié)腸炎脾虛證模型在造模方法上主要選用病因模擬法先復(fù)制脾虛證，如番瀉葉浸泡液灌胃，后選用化學制劑或免疫制劑誘導(dǎo)疾病模型的造模方法，所選化學試劑以5%葡聚糖硫酸鈉（DSS）自由飲用或2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）加50%乙醇混合試劑灌腸為主。
在病證模型研究中，疾病的造模方法多有業(yè)界標準和共識，而以“脾虛”和“標準”/“共識”進行檢索，結(jié)果皆為臨床診療共識，缺乏脾虛證模型行業(yè)標準和共識。譬如，雖有廣為使用的造模方法，但造模時間則是因人而異，由于動物對造模因素有耐受表現(xiàn)，同一指標在不同時間節(jié)點水平不一，進而導(dǎo)致同行間數(shù)據(jù)偏差，難以保證模型的重復(fù)性，無法形成統(tǒng)一結(jié)論。脾虛證型造模方法繁多，涉及復(fù)雜生理系統(tǒng)，評價指標多樣，模型中醫(yī)證型指標皆為類比脾虛患者而來，亟需學界專家達成涉及造模方法、評價指標的共識，以標準規(guī)范發(fā)展。評價指標多從中醫(yī)“脾”的功能和特性類比相應(yīng)生化指標，涉及脾主運化、脾主統(tǒng)血、脾在體合肉主四肢、脾在志為思、脾在液為涎等方面。但在具體研究中評價指標缺乏系統(tǒng)性和整體性，各研究常以單一或少數(shù)指標作為依據(jù)，易造成評價的偏差。由此造成模型的不標準，或者說沒有標準化，但見一“證”便是，也因此造模方法層出不窮，難以出現(xiàn)標準化的模型，兩者互相掣肘。當然也有學者在系統(tǒng)性和整體性進行了有益探索，如陳婉珍等[53]基于代謝組學技術(shù)的脾虛證研究。中醫(yī)經(jīng)典藏象理論中，脾的生理機能、生理特性與形、竅、志、液、時通過精氣陰陽、水谷精微統(tǒng)一起來。而現(xiàn)代科學背景下的脾虛理論研究龐雜而細分，需要綱舉目張，統(tǒng)一理論，各類組學技術(shù)符合中醫(yī)整體觀念，人工智能的突破或許可以幫助梳理理論網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)該積極擁抱前沿技術(shù)，服務(wù)于學術(shù)研究。
綜上所述，脾虛證模型亟需達成涉及造模方法、評價指標的學界共識，系統(tǒng)性和整體性地用指標評價模型，并運用前沿技術(shù)闡釋大統(tǒng)一的現(xiàn)代脾虛理論。
Source: 世界科學技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2024, 26 (03)，脾虛證動物模型研究述評
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